Москва
8 800 200 68 64
8 900 565 28 69
0
0

ПЦР на вирусную нагрузку: как подсчитывают копии РНК гепатита С на миллилитр крови

Natco 24 / Блог / гепатит с / ПЦР на вирусную нагрузку: как подсчитывают копии РНК гепатита С на миллилитр крови

Количественный анализ на ВГС – молекулярно-биологическое исследование, суть которого заключается в подсчете количества копий гепатита С в 1 мл крови. Проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Исследование выполняется для определения уровня вирусной нагрузки, которая учитывается при подборе схемы лечения. Повторный анализ сдают во время противовирусной терапии (ПВТ) для оценки ее эффективности. Если концентрация вирусов в крови не понижается, увеличивают дозировку препаратов или полностью меняют схему лечения.

Когда нужен подсчет количества копий вируса

чат гепатит С

Количественная ПЦР (Real-time PCR) – лабораторный анализ, основанный на выявлении участков РНК или ДНК возбудителя инфекции в исследуемом биоматериале. Чтобы определить уровень виремии при заражении Hepatitis C Virus (HCV), подсчитывают число копий вируса в 1 мл крови.

Количественный анализ на гепатит С выполняется при:

  • обнаружении антител к вирусу гепатита;
  • положительном качественном анализе на HCV-инфекцию;
  • микст-гепатитах (заражении несколькими гепатитами);
  • планировании антивирусной терапии;
  • контроле результативности ПВТ;
  • прогнозировании осложнений.

Определение числа копий вируса гепатита С (ВГС) рекомендовано на всех этапах лечения. Уменьшение концентрации РНК свидетельствует о положительной динамике, высоких шансах на достижение устойчивого вирусологического ответа (УВО).

Количественный ПЦР-анализ – молекулярно-биологическое исследование, по результатам которого оценивают вирусную нагрузку и эффективность ПВТ.

Методы диагностики

При подозрении на гепатит С выполняют 3 основных типа ПЦР – качественный, генотипирование и количественный. В первом случае выявляют генетический материал возбудителя, во втором – уточняют штамм, а в третьем – подсчитывают число копий вируса.

Полимеразная цепная реакция определяет болезнетворные микроорганизмы путем обнаружения РНК или ДНК в пробах. Для подсчета копий генетического материала многократно удваивают отдельные фрагменты нуклеиновой кислоты, которая содержится в ядрах патогенов. В присутствии ДНК-полимеразы копируются строго определенные участки РНК возбудителя гепатита.

Этапы ПЦР-диагностики для подсчета числа копий ВГС:

  1. Выделение генетического материала. Из капли крови выделяют РНК возбудителя гепатита. Для этого прибегают к центрифугированию и растворению осадка.
  2. Копирование участков РНК. Пробирка с рибонуклеиновой кислотой помещается в термостат, в котором она подвергается многократным циклам нагрева и охлаждения. Амплификация включает несколько фаз – денатурацию, отжиг и достраивание матричной цепи. К концу второго этапа в пробирке накапливается много копий вируса гепатита, которые можно идентифицировать и посчитать.
  3. Электрофорез. Полученный субстрат помещают в специальную форму, заполненную гелем. Через исследуемый образец пропускают ток, вследствие чего копированные фрагменты нуклеиновых кислот отталкиваются друг от друга. Они становятся хорошо различимыми в лучах ультрафиолета, поэтому лаборант может определить количество РНК.

При выполнении Real-Time ПЦР в исследуемый материал добавляют раствор с флуоресцентными метками. Это позволяет определять число копий гепатита после каждого цикла подогрева и охлаждения.


Виды ПЦР для подсчета копий HCV:

  • Метод разветвленной ДНК. Чувствительность тест-системы не превышает 500 МЕ/мл, поэтому подсчитать копии вируса при минимальной вирусной нагрузке невозможно. Суть метода заключается в применении 2 нуклеотидных зондов. Первый связывается одним концом с РНК патогена, а другой – с искусственно созданной разветвленной ДНК. После гибридизационной амплификации – увеличения числа копий ВГС – в среду вносится второй меченый зонд. Он связывается с разветвленной ДНК, за счет чего удается визуализировать копии РНК в ультрафиолетовом свете.
  • Метод транскрипционной амплификации (ТМА). Высокочувствительный анализ выявляет возбудителя гепатита С при его минимальной концентрации в крови – от 5 МЕ/мл. Перед выполнением стандартной ПЦР синтезируют комплементарную ДНК (кДНК) методом реакции обратной транскрипции. Для него применяется фермент ревертаза – обратная транскриптаза. Чтобы количество копий кДНК точно соответствовало числу исследуемой матричной РНК (мРНК), в среду вносят праймер. В 90% случаев применяют гексамеры – специальные полимеры, способные транскрибировать РНК.

Real-time PCR – высокочувствительный метод, в рамках которого удается выявить ВГС при минимальном количестве копий в крови – от 50 МЕ/мл. При сомнительных результатах серологического теста рекомендуется использовать ультра-тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл.

Расшифровка анализа на вирусную нагрузку

Результаты количественного анализа на гепатит С оцениваются гепатологом или инфекционистом путем сравнивания полученных данных с нормой. В зависимости от уровня виремии врач подбирает оптимальную дозу лекарств и продолжительность ПВТ.

Количество копий, МЕ/мл Трактовка результата
не обнаружено возбудитель гепатита отсутствует или его концентрация находится за порогом чувствительности тест-системы
до 3*10^4 низкая вирусная нагрузка
от 3*10^4 до 8*10^5 средний уровень виремии
выше 8*10^5 МЕ/мл высокая вирусная нагрузка

Чем ниже вирусная нагрузка, тем благоприятнее прогноз терапии гепатита С. При высокой виремии лечение начинают как можно раньше, что связано с большим риском осложнений.

Между количеством копий ВГС и тяжестью течения гепатита С нет прямой взаимосвязи. Чтобы оценить структурные изменения в печени, требуются инструментальные и аппаратные исследования.

Что может исказить результаты анализа:

  • нарушение лаборантом правил антисептики;
  • неправильный сбор и хранение биоматериала;
  • употребление перед сдачей крови препаратов с гепарином;
  • игнорирование правил подготовки к исследованию.

Количественная ПЦР – анализ, при котором определяются копии РНК возбудителя и инфекционная нагрузка. Результаты исследования учитываются при разработке стратегии лечения, оценке ее эффективности.

22 Ноя 2019 | Автор: Александр Гроссман
Похожие статьи
Возврат денег
Если правильно подобранная терапия не принесла результатов, мы готовы вернуть 100% от суммы заказа.
Документация
Перед оплатой вы можете ознакомиться с документами на каждый препарат.
Оплата после вскрытия
Вы оплачиваете курьеру заказ только после вскрытия и проверки препаратов!
Быстрая доставка
Не надо ждать посылку из Индии и собирать документы для таможни. Мы доставим лекарства Вам в руки в срок от 1 до 5 дней.
Рассрочка
Вы можете покупать препараты помесячно, не переплачивая.
4 года лечим людей
С 2015 года мы совершенствовались в этой области, и с каждым днем наш сервис становится только лучше.
Мы искренне заинтересованы в вашем излечении, основная часть наших клиентов приходит по рекомендациям от уже вылечившихся людей
Консультация врача
У нас можно получить консультацию практикующего врача- инфекциониста, который будет помогать вам на протяжении всего курса лечения!
Проконсультироваться